warga negara kita telah lama mengenal serta memakai obat-obatan
alami atau yang dikenal dengan obat tradisional. Obat tradisional lebih mudah
diterima oleh warga karena selain telah akrab dengan warga , obat ini
lebih murah dan mudah didapat . ada berbagai macam
obat tradisional yang berasal dari tanaman dan telah banyak diteliti kandungan
kimia dan khasiat yang berada di dalamnya. Namun, masih banyak tanaman yang
belum diketahui kadar toksisitasnya, sehingga perlu diteliti lebih lanjut
Semua yang diciptakan Allah SWT memiliki manfaat, termasuk tumbuh-
tumbuhan. Untuk pemanfaatan tumbuhan ini , diperlukan ilmu dan
pengalaman (teoritis dan empiris) dengan penelitian eksperimen. Salah satunya
dalam pemanfaatannya sebagai obat.
Salah satu tumbuhan yang dipakai oleh warga sebagai obat
tradisional adalah daun majapahit (Crescentia cujete L.). Secara empiris, daun
majapahit banyak dipakai oleh warga sebagai obat borok, kudis, bisul,
demam, dan radang selaput lendir hidung (Hariana, 2008).
Untuk mengidentifikasi senyawa dari daun majapahit (Crescentia cujete
L.) yang dapat berpotensi efek sitotoksik, maka perlu diketahui tentang nilai
Lethal Concentration 50 (LC50). LC50 adalah kadar yang menyebabkan kematian
50% hewan uji pada percobaan selama waktu tertentu (Lu, 1995). Berdasarkan
LC50 dapat diketahui tingkat aktivitas suatu senyawa. Apabila nilai LC50 suatu
senyawa hasil isolasi atau ekstrak tanaman kurang 1000 µg/ml, maka senyawa
ini dapat diduga memiliki efek sitotoksik
Metode yang sering dipakai untuk mengetahui potensi efek sitotoksik
suatu senyawa adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Kelebihan metode ini
adalah cukup praktis, murah, sederhana dan cepat tapi tidak mengesampingkan
kekuatannya untuk skrining awal tanaman berpotensi antikanker dengan
memakai hewan uji larva artemia (Artemia salina L.). Prinsip metode ini
adalah uji toksisitas akut terhadap artemia dengan penentuan nilai LC50 sesudah
perlakuan 24 jam . Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality
Test) dengan memakai larva udang Artemia salina L. dianggap memiliki
korelasi dengan daya sitotoksik senyawa-senyawa antikanker, sehingga sering
dipakai untuk skrining awal pencarian senyawa antikanker (Carballo et at,
2002).
Parameter yang dipakai untuk menunjukkan adanya aktivitas biologis
suatu senyawa pada Artemia salina adalah kematian. Keuntungan pemakaian
Artemia salina sebagai hewan uji adalah kesederhanaan dalam pelaksanaan,
waktu yang relatif singkat dan konsentrasi kecil sudah dapat menimbulkan
aktivitas biologi ,
Berdasarkan hasil penelitian yang telah Dalam Al-Qur’an banyak
disebutkan mengenai potensi tumbuh-tumbuhan yang dapat dimanfaatkan oleh
manusia. Sebagimana yang telah dijelaskan dalam Q.S Asy-syu’ara / 26; 7
Dan Apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya
Kami tumbuhkan di bumi itu berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang
baik ?
Kata ila pada firman-Nya di awal ayat ini : awalam yara ila al-aradh,
apakah mereka tidak melihat ke bumi, merupakan kata yang mengandung makna
batas akhir. Ia berfungsi memperluas arah pandangan hingga batas akhir, dengan
demikian ayat ini mengundang manusia untuk mengarahkan pandangan hingga
batas kemampuannya memandang sampai mencakup seantero bumi, dengan aneka
tanah dan tumbuhannya dan aneka keajaiban yang terhampar pada tumbuh-
tumbuhannya. Kata karim, antara lain dipakai untuk menggambarkan segala
sesuatu yang baik bagi setiap objek yang disifatinya. Tumbuhan yang baik paling
tidak adalah yang subur dan bermanfaat (Shihab, 2007) .
Kata kam ambatna berarti berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik
yang ditafsirkan oleh mufassir yaitu berbagai tumbuh-tumbuhan yang ada di bumi
yang dimakan oleh manusia dan binatang, Zaujin berarti berbagai macam tanaman
ditafsirkan sebagai macam-macam tumbuhan dari berbagai jenis ada yang
berwarna putih, merah dan lain-lain. Menurut Sa’id bin Jubair, yang dimaksud
dengan karim ialah yang baik, demikian juga pendapat Qatadah. Sesuatu yang
baik, banyak memberikan manfaat, yang dimakan oleh manusia dan binatang
(Hatim, 1419 H. Al-Nasafi, 1419 H. Al-Dimasyqi, 1416 H).
Hubungan kutipan ayat ini dengan penelitian ini yaitu pemakaian
tumbuhan Majapahit atau pemanfaatan bagian akar dari tumbuhan ini untuk
mendapatkan makna karim pada ayat ini yang berarti segala sesuatu yang
baik khususnya untuk pengembangan daun Majapahit pada pengobatan kanker.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi toksisitas pada ekstrak
daun majapahit (Crescentia cujete L.) menurut metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT). Bentuk ekstrak dipilih dengan harapan akan didapatkan kandungan
senyawa aktif yang ada di dalam daun majapahit (Crescentia cujete L.). Hasil
penelitian ini diharapkan dapat dijadikan bahan informasi tentang potensi
toksisitas akut pada ekstrak daun majapahit (Crescentia cujete L.) sebagai salah
satu tumbuhan yang telah dikenal dan dipakai secara luas oleh warga .
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang masalah di atas maka dirumuskan suatu
permasalahan sebagai berikut:
1. Apakah hasil fraksi daun majapahit (Crescentia cujete L.) berefek toksik
terhadap larva Artemia salina Leach ?
2. Berapakah nilai LC50 dari fraksi daun majapahit (Crescentia cujete L.)
terhadap larva Artemia salina Leach ?
3. Golongan senyawa apa yang terkandung pada fraksi daun majapahit
(Crescentia cujete L.) yang memiliki toksisitas teradap larva udang
Artemia salina L. ?
C. Definisi Operasional dan Ruang Lingkup Penelitian
1. Definisi Operasional
Dalam penelitian ini dipakai beberapa istilah, diantaranya uji toksisitas
akut, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), Artemia salina Leach, ekstrak metanol
daun majapahit (Crescentia cujete L.) dan LC50. Agar tidak terjadi kekeliruan
penafsiran pembaca terhadap variabel-variabel dalam judul, dengan demikian
penjelasan mengenai istilah yang dipakai dalam penelitian adalah sebagai
berikut:
a. Ekstraksi
Ekstraksi merupakan metode penarikan senyawa kimia dari suatu simplisia
berupa tumbuhan, hewan atau mineral.
b. Ekstrak
Ekstrak merupakan hasil ekstraksi atau penarikan senyawa dari suatu
tumbuhuan, hewan atau mineral.
c. Fraksinasi
Fraksinasi merupakan metode pemisahan komponen senyawa dalam ekstrak
menjadi senyawa sederhana namun belum murni.
d. Fraksi
Merupakan hasil dari pemisahan komponen-komponen kimia yang terkandung
dalam ekstrak yang dipisahkan melalui beberapa metode tertentu.
e. Uji toksisitas akut
Merupakan metode uji yang dipakai untuk mengetahui tingkat toksik dari
suatu senyawa yang ditentukan dalam waktu singkat sesudah pemberian suatu
sediaan.
f. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Brine Shrimp Lethality Test merupakan salah satu metode uji toksisitas untuk
menguji bahan-bahan yang bersifat sitotoksik.
g. LC50 (Lethal Concentration 50)
Nilai LC50 merupakan angka yang menunjukkan konsentrasi suatu bahan
penyebab kematian sebesar 50% dari jumlah hewan uji.
2. Ruang Lingkup Penelitian
Adapun ruang lingkup penelitian ini pada bidang farmasi dan fitokimia
dimana pengujian dilakukan mulai dari pengolahan sampel yaitu daun majapahit
(Crescentia cujete L.) mulai dari tahap maserasi sampel hingga uji Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT), waktu yang diperlukan kurang lebih empat minggu.
D. Kajian Pustaka
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Linda Fiskasari dengan judul
penelitian Uji Toksisitas Ekstrak Daun Majapahit (Crescentia cujete L.) Terhadap
Larva Grayak (Spodoptera litura) dengan hasil penelitian menunjukkan bahwa
pemberian ekstrak metanol daun majapahit (Crescentia cujete L.) didapatkan hasil
bahwa ekstrak daun majapahit (Crescentia cujete) bersifat toksik terhadap larva
grayak (Spodoptera litura) instar 2, dan LC50 dari percobaan ini adalah
konsentrasi 38,13 % dalam kurung waktu 2 hari (48 jam), dalam penelitian ini
juga didapatkan hasil bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun majapahit
(Crescentia cujete L.) maka semakin tinggi pula mortalitas larva grayak
(Spodoptera litura).
Menurut Penelitian Anjar Mahardian Kusuma (2014) dengan judul Potensi
Sitotoksik Ekstrak Etanol Daun Majapahit (Crescentia cujete L.) Terhadap Sel
Kanker mengatakan bahwa daun majapahit memiliki beberapa kandungan kimia
yang penting antara lain, flavanoid dan quercetin, tannin, fenol, saponin,
antraquinon. Quersetin sebagai salah satu kandungan majapahit dilaporkan
memiliki efek antikanker baik secara in vitro maupun in vivo. Kandungan
senyawa quercetin dan antraquinon diduga sebagai senyawa yang bertanggung
jawab dalam penghambatan angiogenesis. Penghambatan angiogenesis merupakan
salah satu cara untuk menghambat penyebaran kanker.
Penelitian selanjutnya oleh Binawati Ginting dengan judul penelitian Uji
Toksisitas Ekstrak Daun (Myristica fragrans Houtt) Dengan Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) dengan hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak
metanol daun pala menunjukkan adanya potensi toksisitas akut terhadap larva
Artemia salina Leach yang ditunjukkan dengan harga LC50 < 1000 µg/ml menurut
metode BSLT
Berdasarkan pada penelitian-penelitian sebelumnya diatas maka
dilakukanlah pengujian Ekstrak Metanol Daun Majapahit dengan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) untuk menguji apakah ekstrak dari daun majapahit
dapat menunjukkan efek sitotoksik.
E. Tujuan dan Manfaat Penelitian
1. Tujuan Penelitian
a. Mengetahui hasil fraksi dari daun majapahit (Crescentia cujete L.) yang
berefek toksik terhadap larva Artemia salina Leach ?
b. Mengetahui nilai LC50 dari fraksi daun majapahit (Crescentia cujete L.)
terhadap larva Artemia salina Leach ?
c. Mengetahui golongan senyawa apa yang terkandung pada fraksi daun
majapahit (Crescentia cujete L.) yang memiliki toksisitas teradap larva
udang Artemia salina L. ?
2. Manfaat Penelitian
a. Untuk Peneliti
Hasil dari penelitian ini diharapkan menjadi referensi untuk memberikan
informasi secara ilmiah tentang efek toksisitas dari daun majapahit (Crescentia
cujete L.) terhadap larva udang (Artemia salina Leach) yang dapat mendukung
pengembangan ekstrak daun majapahit (Crescentia cujete L.) sebagai sumber
senyawa bioaktif.
b. Untuk warga
Memberikan informasi kepada warga khususnya untuk daerah Kecamatan
Parangloe bahwa daun majapahit (Crescentia cujete L.) memiliki efek toksik
dan menekan resiko bahaya yang ditimbulkan daun majapahit (Criscentia
cujete L.) bagi manusia. Dan menambah pengetahuan warga mengenai
daun majapahit (Crescentia cujete L.) yang memiliki aktifitas sebagai
sumber senyawa bioaktif.
c. Untuk Institusi
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah, pengetahuan
serta gambaran penemuan senyawa bioaktif dari ekstrak daun majapahit
(Crescentia cujete L.).
A. Uraian Tumbuhan Majapahit (Crescentia cujete L.)
1. Klasifikasi
Klasifikasi daun majapahit (Crescentia cujete L.) menurut Nature Serve
(2017) sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Phyllum : Anthophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Scrophulariales
Famili : Bignoniaceae
Genus : Crescentia
Spesies : Crescentia cujete L.
2. Nama Daerah
Majapahit (Crescentia cujete L.) memiliki nama daerah tabu kayu (Melayu),
bila balanda (Makassar), buah no (Ternate), sikadel, sekopal, majapahit
(negara kita ) (BPTH, 2012).
3. Morfologi
a. Batang
Batangnya berkayu, bulat, bercabang simpodial, beralur dan bewarna putih
kehitaman
b. Daun dan Bunga
Daunnya mejemuk, menyirip, lonjong, tepi rata, ujung membulat, pangkal
meruncing, panjang 10-15 cm, lebar 5-7 cm, bertangkai pendek bewarna hijau dan
pertulangan daunnya menyirip. Bunganya tunggal, di cabang dan ranting, kelopak
bentuk corong, hijau pucat, benang sari empat, panjang ± 2 cm, putih, mahkota
bentuk bibir
c. Buah dan Biji
Buah no, bulat, diameter ± 2 cm, hijau kekuningan. Biji kotak, panjang ± 5 mm,
coklat
d. Akar
Berakar tunggang, putih kotor
4. Kandungan Kimia
Majapahit diketahui memiliki kandungan senyawa bioaktif seperti saponin,
flavanoid dan polifenol
Menurut penelitian Linda Fiskasari juga menyebutkan bahwa semakin
tinggi konsentrasi yang dipakai untuk perlakuan maka kandungan senyawa
metabolit dalam ekstrak ini lebih banyak sehingga daya racunnya semakin
tinggi dengan demikian kematian larva semakin banyak. Peningkatan persentase
mortalitas larva dengan semakin tingginya konsentrasi ekstrak selain karena
besarnya kadar bahan aktif yang bersifat toksik juga diduga karena kurangnya
nutrisi yang dikonsumsi oleh larva akibat adanya senyawa antimakan dalam
ekstrak. Senyawa-senyawa ini meliputi triterpenoid dan tanin. Hal ini
menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi yang dipakai untuk perlakuan
maka kandungan senyawa metabolit dalam ekstrak ini lebih banyak sehingga
diduga ekstrak ini memiliki sifat antifeedan semakin tinggi, dengan
demikian aktivitas makan larva semakin menurun.
Dari hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa di dalam ekstrak metanol daun
majapahit (Crescentia cujete) mengandung senyawa metabolit sekunder berupa
alkaloid, fenolik, triterpenoid dan saponin
Senyawa triterpenoid ini bisa bersifat sebagai antifeedant atau penolak
makan yang memiliki bau menyengat sehingga larva menurun nafsu makannya
dan kekurangan nutrisi sehingga menyebabkan mortalitas pada larva. Kandungan
lain dari daun majapahit adalah saponin, cara kerja saponin adalah memasuki
tubuh larva melalui kulit dengan proses adhesi dan menimbulkan efek sistemik.
Penetrasi senyawa ini ke dalam tubuh serangga melalui epikutikula serangga,
senyawa ini masuk ke dalam jaringan di bawah integumen menuju daerah
sasaran. Masuknya saponin mengakibatkan rusaknya lilin pada lapisan kutikula
sehingga menyebabkan kematian karena larva mengalami banyak kehilangan air
Saponin juga dapat merendahkan tegangan permukaan. Terjadinya interaksi
antara saponin dengan membran sel karena sifat aktif saponin pada permukaan sel,
sehingga saponin mampu berikatan dengan fosfolipid dan kolesterol yang
mengakibatkan terganggunya permeabilitas membran sitoplasma yang dapat
mengakibatkan kebocoran materi intraseluler dan menyebabkan lisis sel
(Maisaroh, 2007).
12
Jika sel lisis maka jaringan-jaringan yang ada pada sel ini rusak dan
tidak bisa saling berhubungan dengan jaringan yang ada pada sel lain. Hal ini akan
mengakibatkan metabolisme sel berhenti dan larva mati. Selain masuk melalui
kutikula, saponin masuk melalui makanan yang dapat memberikan pengaruh
terhadap proses biologi tubuh dan metabolisme zat nutrisi dengan cara
menghambat produktivitas kerja enzim kimotripsin yang mengakibatkan
terganggunya sistem pencernaannya, terhambat perkembangannya dan akhirnya
mati jika tingkat penghambatan pencernaan relatif tinggi (Widodo.2005).
Saponin juga dapat menurunkan aktivitas enzim protease dalam saluran
pencernaan serta mengganggu penyerapan makanan (Shahabuddin, 2009).
Cara kerja alkaloid adalah mendegradasi membran sel untuk masuk ke
dalam dan merusak sel dan juga dapat mengganggu sistem kerja syaraf larva
dengan menghambat kerja enzim asetilkolinesterase. Terjadinya perubahan warna
pada tubuh larva menjadi lebih transparan dan gerakan tubuh larva yang melambat
bila dirangsang sentuhan serta selalu membengkokkan badan disebabkan oleh
senyawa alkaloid (Erwin dan Shaleh, 2012).
Sedangkan fenol dapat menyebabkan cacat bakar dan amat beracun (Cania
dan Setyaningrum, 2013).
5. Kegunaan
Beberapa bahan kimia yang terkandung dalam majapahit diantaranya zat
lemak dan minyak yang mengandung linonen. Daging buah majapahit
mengandung substansi semacam minyak balsem, 2-furocoumarinspsoralen, dan
marmelosin (C13H12O3). Buah, akar, dan daun majapahit bersifat toksik. Daun
13
disebutkan dapat menyebabkan aborsi dan steril bagi wanita. Sementara ranting
dipakai sebagai racun ikan. Tanin yang dipakai dalam jangka waktu lama
bersifat antinutrisi dan menyebabkan kanker (Hariana, 2008).
Majapahit berkhasiat sebagai obat disentri, diare, penyakit jantung,
hipokondria (muram merasa sakit), melancholia (murung), sakit usus, koreng,
kudis dan bisul (Agromedia, 2008).
Efek farmakologis akar majapahit diantaranya mengobati demam. Kulit
batang dan akar majapahit untuk obat nyeri jantung, stomakikum, dan sedatif.
Daun majapahit untuk borok, kudis, eksim, bisul, abortif, demam, dan radang
selaput lender hidung. Buah maja untuk disentri dan diare sedangkan kulit
buahnya untuk pewangi (Hariana, 2008).
B. Uraian Larva Udang (Artemia salina Leach) (Mudjiman, 1988: 15)
1. Klasifikasi (Dumitrascu, 2011)
Divisi : Animal
Phylum : Arthropoda
Kelas : Crustaceae
Subkelas : Branchiopoda
Ordo : Anostraca
Familia : Arthemidae
Genus : Artemia
Species : Artemia salina Leach
14
2. Morfologi (Mudjiman, 1998: 15-25)
Artemia merupakan kelompok udang-udangan dari phylum Arthopoda,
Artemia hidup di danau-danau garam (berair asin) yang ada diseluruh dunia.
Udang ini toelran terhadap selang salinitas yang sangat luas, mulai dari nyaris
tawar hingga jenuh garam. Apabila kadar garam kurang dari 6% telur Artemia
akan tenggelam hingga telur tidak dapat menetas, sedangkan apabila kadar garam
lebih dari 25% telur akan berada dalam kondisi tersuspensi, sehingga dapat
menetas dengan normal (Purwakusuma, 2009).
Tingkat hidup Artemia salina Leach mengalami beberapa tingkatan, tetapi
secara jelas dapat dilihat dalam 3 bentuk yang sangat berlainan yaitu bentuk telur,
nauplius (larva) dan artemia dewasa.
Secara berkala, pada saat air laut atau danau menguap, partikel0partikel
yang berwarna coklat, berdiameter sekitar 0,2-0,3 mm akan naik kepermukaan,
oleh angina akan di bawa hanyut ke darat. Partikel ini merupakan telur-telur
inaktif atau tidur dari Artemia salina Leach. Sepanjang telur-telur ini
terhidrasi dan dalam keadaan diapause, akan memiliki ketahanan dan kestabilan
dalam penyiapan yang lama.
Jika telur-telur ini (yang embrionya dalam keadaan dispauze)
direndam dalam larutan bergaram (air laut), telur akan menyerap air laut hingga
menggembung. Proses penyerapan ini berlangsung secara hiperosmotik yaitu
adanya tekanan osmose di dalam telur yang lebih tinggi dari pada di luarnya.
sesudah telur menggembung dan metabolism berlangsung terus, untuk
mencapai tingkatan ini dibutuhkan waktu sekitar 15 jam. Terjadinya pemecahan
15
cangkang telur yang keras itu dibantu oleh kegiatan enzim yaitu enzim penetasan
pada pH lebih dari 8. Sekitar 17 jam perendaman, embrio yang keluar dari
cangkang yang masih dibungkus oleh selaput penetasan tumbuh terus hingga
akhirnya keluar dari selaputnya menjadi makhluk hidup baru, yaitu waktu 19 jam,
hingga rata-rata berkisar 24-36 jam. Dalam pengembangan selanjutnya, burayak
mengalami metamorphosis. Pada tingkatan Instar I, kandungan energi masih
cukup tinggi. Sekitar 24 jam kemudian, mereka sudah berubah menjadi Instar II
mulai memiliki mulut, saluran pencernaan dan dubur.Oleh karenanya mencari
makanan. Demikian seterusnya sampai Instar XV. sesudah itu berubah menjadi
artemia dewasa. Proses ini biasanya berlangsung 1-3 minggu.
Tubuh terbagi atas bagian kepala, dada dan perut, pada bagian kepala
ada 2 tungkai mata, 2 antena dan 2 antenula. Dada terbagi atas 11 segmen
yang masing-masing memiliki sepasang kaki renang, sedangkan perut terbagi
atas 8 segmen. Artemia salina dewasa bentuknya telah sempurna. Reproduksi
artemia salina dapat dengan bertelur atau dengan melahirkan anak. Pergantian
reproduksi ini dimungkinkan oleh jumlah klorofil dalam makanannya dan factor
oksigen dalam lingkungan. Konsentrasi oksigen yang rendah dan klorofil yang
tinggi dalam makanannya menyebabkan reproduksi dengan telur, dan sebaliknya
akan menyebabkan reproduksi dengan melahirkan anak (Mudjiman, 1998).
Kandungan kimia yang ada dalam tubuh Artemia salina adalah protein
dan asam lemak yang tinggi. Nilai nutrisi Artemia dewasa memiliki
keunggulan, yaitu kandungan proyeinnya meningkat dari rata-rata 47% pada
nauplius menjadi 60% pada Artemia dewasa yang telah dikeringkan (Gebo, 2000).
16
3. Lingkungan Hidup
Artemia salina hidup planktonic diperairan berkadar garam tinggi, suhu
yang dikehendaki berkisar antara 25oC-30oC, oksigen terlarut sekitar 3 mg/L dan
pH antara 7,3–8,4. Artemia salina Leach tidak dapat mempertahankan diri dari
pemangsa musuh-musuhnya karena tidak memiliki alat atau cara untuk
membela diri, salah satu cara menghindarkan diri dari pemangsa hewan lain
dengan berpindah kekondisi alam berupa lingkungan hidup berkadar garam tinggi.
Pada umumnya pemangsa tidak dapat hidup lagi pada kondisi itu (Mudjiman,
1995). Makanan Artemia salina terdiri atas genggang retnik, bakteri cendawan.
Dalam pemeliharaan makanan yang diberikan adalah katul padi, tepung terigu,
tepung kedelai dan ragi (Mudjiman, 1995).
4. Perkembangan dan Siklus Hidup
Perkembangannya yaitu jenis biseksual dan jenis pertenogenik. Keduanya
dapat terjadi ovovivipar atau avipar. Pada ovovivipar keluar induknya sudah
berupa anak yang dinamakan naplius, sedangkan pada ovipar anak keluar dari
induknya berupa telur, bercangkang tebal yang dinamakan siste.
Perkembangbiakan jenis biseksual harus melalui proses perkawinan antara induk
jantan dan induk betina. Pada jenis parthenogenesis tidak ada perkawinan karena
memang tidak pernah ada jantannya. Jadi, betina akan beranak dengan sendirinya
tanpa perkawinan (Mudjiman, 1995).
5. pemakaian Artemia salina Leach dalam Penelitian
Suatu metode uji hayati yang tepat dan murah untuk skrining dalam
menentukan toksisitas suatu ekstrak tanaman aktif dengan memakai hewan uji
17
Artemia salina Leach. Artemia sebelumnya telah dipakai dalam bermacam-
macam uji hayati seperti uji pestisida, polutan, mikotoksin, anestetik, komponen
seperti morfin, kekarsinogenikan dan toksikan dalam air laut. Uji dengan
organisme ini sesuai untuk aktifitas farmakologi dalam ekstrak tanaman yang
bersifat toksik. Penelitian dengan memakai Artemia salina memiliki beberapa
keuntungan antara lain cepat, murah dan sederhana.
Penetasan telur Artemia salina yang baik perlu memperhatikan beberapa
faktor yaitu: hidrasi dari kista-kista, aerasi, penyinaran, suhu, derajat keasaman
(pH), dan kepadatan telur dalam media penetasan.
Penelitian dengan larva Artemia salina Leach telah dipakai oleh Pusat
Kanker Purdue, Universitas Purdue di Lafayette untuk senyawa aktif tanaman
secara umum dan tidak spesifik untuk zat anti kanker. Namun demikian hubungan
yang signifikan dari sampel yang bersifat toksik terhadap larva Artemia salina
Leach ternyata juga memiliki aktifitas sitotoksik. Berdasarkan hal ini
maka larva Artemia salina Leach dapat dipakai untuk uji sitotoksik (Mayer,
1982).
C. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Metode BSLT merupakan langkah pertama untuk uji toksisitas suatu
ekstrak atau senyawa. Metode ini merupakan metode hayati yang sederhana, cepat,
murah, dan dapat dipercaya. Daya toksisitas suatu senyawa dapat diketahui dengan
menghitung jumlah kematian larva Artemia salina dengan parameter Lethal
concentration 50 (LC50). Suatu ekstrak dinyatakan bersifat toksik menurut metode
BSLT ini jika memiliki LC50 kurang dari 1000 µg/ml. jika hasil uji BSLT
18
menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan bersifat toksik maka dapat dikembangkan
ke penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi senyawa sitotoksik tumbuhan sebagai
usaha pengembangan obat alternatif anti kanker.
Belakangan ini telah banyak pengujian tentang toksisitas yang
dikembangkan untuk pencarian produk alam yang potensial sebagai bahan
antineoplastic. Metode pengujian ini antara lain Simple Brench-Top Bioassay
(terdiri dari Brine Lethality Test), Lemna Minor Bioassay dan Crown-Gall Potato
disc bioassay) dan pengujian pada sel telur bulubabi. Pengujian efek toksik dengan
larva Artemia salina dihitung dengan metode LC50 yang mana kematian sesudah 6
jam pemaparan dimasukkan dalam kategori LC50 akut dan pemaparan sesudah 24
jam digolongkan LC50 kronis, dan dalam pengerjaannya biasanya dipakai LC50
sesudah 24 jam meningat kelarutan ekstrak yang sukar larut membutuhkan waktu
lebih panjang (Mc Laughlin, 1991).
Metode ini sering dipakai untuk praskrining terhadap senyawa aktif
yang terkandung di dalam ekstrak tanaman karena murah, mudah (tidak perlu
kondisi aseptis) dan dapat dipercaya. Sifat sitotoksik dapat diketahui berdasarkan
jumlah kematian larva pada konsentrasi tertentu. Suatu ekstrak dikatakan toksik
jika memiliki nilai LC50 kurang dari 1000 µg/ml sesudah waktu 24 jam (Indriyani,
Soetjipto, 2008). Pengujian ini dipertimbangkan sebagai uji pendahuluan toksisitas
dan dipakai untuk mengetahui toksin jamur, toksisitas ekstrak tanaman, logam
berat, toksin cyanobacteria, pestisida, dan uji sitotoksisitas bahan pembuatan gigi
(Carballo, et al., 2002).
19
Uji toksisitas larva Artemia salina (Brine Shrimp Lethality Test) sering
dianalogkan dengan kamampuan suatu bahan obat yang memiliki efek antikanker.
Metode ini disarankan untuk dipakai pada skrining senyawa bioaktif bahan
alam karena menunjukkan adanya korelasi dengan metode sitotoksik in vitro
lainnya (Carballo, et al., 2002).
D. Kanker
Kanker adalah penyakit yang tidak mengenal status sosial dan dapat
menyerang siapa saja dan muncul akibat pertumbuhan tidak normal dari sel-sel
jaringan tubuh yang berubah menjadi sel kanker dalam perkembangannya. Sel-sel
kanker ini dapat menyebar ke bagian tubuh lainnya sehingga dapat menimbulkan
kematian (Dinnel, 1987).
Kanker adalah suatu poliferasi sel-sel yang tidak teratur. Pada beberapa
kasus, laju poliferasi sangat tinggi. Yang membedakan kanker dengan pembelahan
sel normal yaitu sel-sel kanker tidak pernah berhenti membelah (Kimball, 1983).
Sel kanker berbahaya karena dapat menyebabkan kematian baik secara
angsung maupun tidak langsung. Sel kanker tumbuh dengan cepat, sehingga sel
kanker pada umumnya cepat menjadi besar. Sel kanker menyusup ke jaringan
sehat sekitarnya, sehingga dapat digambarkan seperti kepiting dengan kaki-
kakinya mencengkram alat tubuh yang terkena. Di samping itu, sel kanker dapat
menyebar (metasis) ke bagian alat tubuh lainnya yang jauh dari tempat asalnya
melalui pembuluh darah dan pembuluh getah bening sehingga tumbuh kanker baru
di tempat lain. Penyebaran sel kanker ke jaringan sehat pada alat tubuh lainnya
20
dapat merusak alat tubuh ini sehingga fungsi alat ini menjadi terganggu
Kanker merupakan suatu penyakit yang disebabkan oleh terganggunya
kontrol regulasi pertumbuhan sel-sel normal. Sebagai bukti dari terganggunya
kontrol regulasi sel-selnya, kanker memiliki perbedaan yang mencolok
dibandingkan dengan sel-sel normal dalam tubuh kita
1. Sel kanker tak mengenal program kematian sel yang dikenal dengan nama
apoptesis. Apoptesis sangat dibutuhkan untuk mengatur berapa jumlah sel yang
dibutuhkan dalam tubuh kita, yang mana semunya fungsional dan menempati
tempat yang tepat dengan umur tertentu. Bila telah melewati masa hidupnya,
sel-sel normal (nonkanker) akan mati dengan sendirinya tanpa ada efek
peradangan (inflamasi). Sel kanker berbeda dengan karakteristik ini . Dia
akan terus hidup meski seharusnya mati (Immortal).
2. Sel kanker tidak mengenal komunikasi ekstra seluler atau asosial. Komunikasi
ekstra seluler diperlukan untuk koordinasi antar sel sehingga mereka dapt saling
menunjang fungsi masing-masing. Dengan sifatnya yang asosial, sel kanker
bertindak semaunya sendiri tanpa peduli apa yanag dibutuhkan oleh
lingkungannya`
3. Sel kanker mampu menyerang jaringan lain (invasive), merusak jaringan
ini dan tumbuh subur di atas jaringan lain.
4. Untuk mencukupi kebutuhan pangan dirinya sendiri, sel kanker mampu
membentuk pembuluh darah baru (neoangiogenesis) meski itu tentunya dapat
mengganggu kestabilan jaringan tempat ia tumbuh.
5. Sel kanker memiliki kemampuan dalam memperbanyak dirinya sendiri
(poliferasi) meski seharusnya ia sudah tak dibutuhkan dan jumlahnya sudah
melebihi kebutuhan yang seharusnya.
Kanker berkembang melalui serangkaian proses yang disebut
karsinogenesis. Karsinogenesis pada dasarnya dibagi menjadi dua tahap utama
yaitu inisiasi dan promosi, namun beberapa literatur menambahkan bahwa tahap
promosi kanker diikuti oleh poliferasi metastatis dan neoangiogenesis
Tahap inisiasi ialah tahap dimana agen karsinogenik (zat yang dapat
menimbulkan kanker) mulai bekerja mengubah susunan DNA fungsional atau
yang lenbih popular dengan nama “gen” sehingga gen itu menjadi berbeda dengan
semestinya atau terjadi mutasi. Biasanya gen yang berubah susunannya adalah gen
yang berfungsi untuk menekan pertumbuhan tumor (tumor suppressor gene),
misalnya saja gen p53
Agen karsinogenik banyak sekali macamnya dan secara umum sangat
berkaitan dengan pola makan dan pola hidup manusia, seperti paparan sinar ultra
violet, radiasi sinar gamma, asbestos, merkuri, asap kendaraan bermotor, asap
rokok, bahan pengawet makanan seperti natrium benzoate, pewarna makanan
misalnya rhodamin, tak ketinggalan pula bumbu masakan sintesis (penyedap
masakan) yaitu MSG (Monosodium/Mononatrium Glutamat) yang makin hari
makin beragam dan makin banyak dipakai karena harganya yang relatif murah
dan tersedia dalam berbagai rasa buatan. Ditambah dengan cara pemakaian yang
jauh lebih praktis daripada bumbu dapur alami, makin lengkaplah alasan
kebanyakan konsumen saat ini untuk memakai bumbu sintesis itu
E. Toksisitas
Toksisitas ialah efek berbahaya dari suatu bahan obat pada organ target.
Uji toksisitas dilakukan untuk mengetahui tingkat keamanan dan keberbahayaan
zat yang akan diuji. Adapun sumber zat toksik dapat berasal dari bahan alam
maupun sintetik. Toksisitas diukur dengan mengamati kematian hewan percobaan.
Kematian dari hewan percobaan dianggap sebagai respon dari pengaruh senyawa
yang diuji, sehingga hubungan dari respon dengan memakai kematian sebagai
jawaban toksis adalah titik awal untuk mempelajari toksisitas
Toksisitas diidentifikasikan sebagai kemampuan suatu zat untuk
menimbulkan kerusakan. Toksisitas merupakan suatu sifat relative dari zat kimia
dan sejauh menyangkut diri manusia secara langsung maupun tidak langsung.
Toksisitas selalu menunjukkan ke suatu efek berbahaya atau mekanisme biologi
tertentu. Toksistas merupakan istilahrelatif yang biasa dipergunakan dalam
membandingkan suatu zat kimia lebih toksik dari zat kimia lainnya. Perbandingan
antara zat kimia seperti itu sangat tidak informatif, kecuali jika pernyataan itu
melibatkan informasi tentang mekanisme biologi yang sedang dipermasalahkan
dan juga dalam kondisi bagaimana zat kimia ini berbahaya. Karena itu,
pendekatan toksikologi adalah dari segi tentang berbagai efek zat kimia atas
berbagai system biologi dengan penekanan pada sistem mekanisme efek
berbahaya zat kimia itu dan kondisi dimana efek berbahaya itu terjadi. Kematian
merupakan salah satu diantara beberapa kriteria toksisitas. Salah satu caranya ialah
memakai senyawa dengan dosis maksimal, kemudian kematian hewan uji
dicatat. Angka kematian hewan dihitung sebagai harga median Lethal Dose (LD50)
atau median Lethal Concentration (LC50).
Uji toksisitas dibagi 2 golongan yaitu uji toksisitas tak khas (akut,
subkronis dan kronis) dan uji toksisitas khas yang meliputi potensi teratogenik,
mutagenik dan karsinogenik.
a. Uji Toksisitas Akut
Uji ini dirancang untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang akan
terjadi dalam masa pemejanan dengan waktu yang singkat atau pemberiannya
dengan takaran tertentu. Uji ini dilakukan dengan cara pemberian konsentrasi
tunggal senyawa uji pada hewan uji. Takaraan konsentrasi yang dianjurkan paling
tidak empat peringkat konsentrasi, berkisar dari konsentrasi terendah yang tidak
atau hampir tidak mematikan seluruh hewan uji sampai dengan konsentrasi
tertinggi yang dapat mematikan seluruh atau hamper seluruh hewan uji. Biasanya
pengamatan dilakukan selama 24 jam, kecuali pada kasus tertentu selama 7-14
hari.
b. Uji Toksisitas Subkronis atau Subakut
Dilakukan dengan memberikan zat kimia yang sedang diuji ini secara
berulang-ulang terhadap hewan uji selama kurang dari 3 bulan. Uji ini ditujukan
untuk mengungkapkan spektrum efek toksik senyawa uji, serta untuk melihatkan
apakah spektrum toksik itu berkaitan dengan takaran konsentrasi.
c. Uji Toksisitas Kronis
Dilakukang dengan memberikan zat kimia secara berulang-ulang pada
hewan uji selama lebih dari 3 bulan atau sebagian besar dari hidupnya. Meskipun
pada penelitian dipakai waktu lebih pendek, tetapi tetap lebih lambat
dibandingkan Uji Toksisitas Akut maupun Uji Toksisitas Sub Akut.
Belakangan ini telah banyak pengujian tentang toksisitas yang
dikembangkan untuk pencarian produk alam yang potensial sebagai bahan
antineoplastik. Metode pengujian ini antara lain Simple Brench-Top Biassay
(terdiri dari Brine Shrimp Lethality test, Lemna Minor Bioassay dan Crown-Gall
Potato disc bioassay) dan pengujian pada sel telur bulubabi.
Dengan berdasarkan pemikiran bahwa efek farmakologi adalah toksikologi
sederhana pada osis yang rendah dan sebagian besar senyawa antitumor adalah
sitotoksik, maka Brine Shrimp Lethality test dapat dipakai sebagai uji
pendahuluan senyawa antitumor. Senyawa yang memiliki kemampuan
membunuh sel kanker dalam kulur sel. Pengujian ini adalah pengujian letalitas
yang sederhana dan tidak spesifik untuk aktifitas tumor, tetapi merupakan
indicator toksisitas yang baik dan menunjukkan korelasi yang kuat dengan
pengujian antitumor lainnya seperti uji sitotoksitas dan uji leukemia tikus. Karena
kesederhanaan prosedur pengerjaan, biaya yang rendah serta korelasinya terhadap
pengujian toksisitas dan pengujian antitumor menjadikan Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) sebagai uji hayati pendahuluan untuk aktifitas antitumor yang sesuai
dan dapat dilakukan secara rutin di Laboratorium dengan fasilitas sederhana. Uji
toksisitas sebagai skrining awal dapat dilakukan dengan berbagai metode antara
lain adalah metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT) adalah suatu metode uji guna untuk menentukan toksisitas
suatu senyawa bahan alam dengan cepat, murah da cukup akurat untuk penapisan
ekstrak bahan aktif dengan memakai hewan uji Artemia Salina Leach yang
berumur 48 jam.
1) Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Pengujian efek toksik dengan larva udang Artemia salina dihitung dengan
metode LC50 yang mana kematian sesudah 6 jam pemaparan dimasukkan dalam
kategori LC50 akut dan pemaparan sesudah 24 jam digolongkan LC50 kronis, dan
dalam pengerjaannya biasanya dipakai LC50 sesudah 24 jam mengingat
kelarutan ekstrak yang sukar larut membutuhkan waktu yang lebih panjang
Uji toksisitas memakai larva Artemia salina (Brine Shrimp Lethality
Test) sering dianalogkan dengan kemampuan suatu bahan obat yang memiliki efek
antikanker. Metode ini disarankan untuk dipakai pada skrining senyawa
bioaktif bahan alam karena menunjukkan adanya korelasi dengan metode
sitotoksik in vitro lainnya .
Metode ini sering dipakai untuk praskrining terhadap senyawa aktif
yang terkandung di dalam ekstrak tanaman karena murah, mudah (tidak perlu
kondisi aseptis) dan dapat dipercaya. Sifat sitotoksik dapat deketahui berdasarkan
jumlah kematian larva pada pada konsentrasi tertentu. Uji pendahuluan toksisitas
dipakai untuk mengetahui toksin jamur, toksisitas ekstrak tanaman, logam
berat, toksin cyanobacteria, pestisida, dan uji sitotoksisitas bahan pembuatan gigi
Uji toksisitas akut dengan hewan uji Artemia salina dapat dipakai
sebagai uji pendahuluan pada penelitian yang mengarah ke uji sitotoksik, karena
ada kaitan antara uji sitotoksik akut dengan uji sitotoksik jika harga LC50 dari
toksisitas akut < 1000µg/ml .
2) Lemna Minor Biossay
Metode ini terutama dipakai sebagai uji pendahuluan ada bahan
yang dapat menghambat dan meningkatkan pertumbuhan tanaman. Dengan
pengujian ini dapat diamati bahwa senyawa antitumor alami juga dapat
menghambat pertumbuhan Lemna, walaupun korelasinya dengan pengujian
antitumor lainnya kurang baik. Oleh karena itu pengujian ini lebih diarahkan untuk
mencari herbisida dan stimulant pertumbuhan tanaman baru.
3) Crown-Gall Potato Bioassay
Metode inimerupakan metode pengujian toksisitas yang relative cepat
pengerjaannya, tidak mahal, tidak memerlukan hewan percobaan serta
menunjukkan korelasi yang sangat baik dengan uji antitumor lainnya. Crown-Gall
merupakan suatu penyakit neoplastic pada tumbuhan yang disebabkan bakteri
gram negatif Agrobacterium tumefaciens yang selanjutnya menyebabkan
pertumbuhan jaringan tumor secara otonom dan tidak dipengaruhi oleh mekanisme
kontrol normal tumbuhan. Pengujian dilakukan dengan mengukur kemampuan
suatu senyawa menghambat pertumbuhan tumor Crown-Gall pada umbi kentang y
ang di infeksikan dengan bakteri Agrobacterium tumefaciens.
F. Ektraksi
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau hewani memakai pelarut yang sesuai,
kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dari massa atau serbuk yang
tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan
Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik dan memisahkan senyawa yang
memiliki kelarutan berbeda–beda dalam berbagai pelarut komponen kimia yang
ada dalam bahan alam baik dari tumbuhan, hewan, dan biota laut dengan
memakai pelarut organik tertentu (Dirjen POM, 2000).
Pemilihan metode ekstraksi tergantung pada sifat bahan dan senyawa yang
akan diisolasi. Sebelum memilih suatu metode, target ekstraksi perlu ditentukan
terlebih dahulu. Ada be-berapa target ekstraksi, diantaranya
1. Senyawa bioaktif yang tidak diketahui
2. Senyawa yang diketahui ada pada suatu organisme
3. Sekelompok senyawa dalam suatu organisme yang berhubungan secara
struktural.
Jenis-jenis ekstraksi:
a. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan memakai
pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar). Maserasi bertujuan untuk menarik zat-zat berkhasiat yang tahan
pemanasan maupun yang tidak tahan pemanasan. Secara teknologi maserasi
termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada
keseimbangan. Maserasi dilakukan dengan beberapa kali pengocokan atau
pengadukan pada temperatur ruangan atau kamar
Maserasi merupakan metode sederhana yang paling banyak dipakai .
Cara ini sesuai, baik untuk skala kecil maupun skala industri. Metode ini
dilakukan dengan memasukkan serbuk tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam
wadah inert yang tertutup rapat pada suhu kamar. Proses ekstraksi dihentikan
ketika tercapai kesetimbangan antara konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan
konsentrasi dalam sel tanaman. sesudah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari
sampel dengan penyaringan. Kerugian utama dari metode maserasi ini adalah
memakan banyak waktu, pelarut yang dipakai cukup banyak, dan besar
kemungkinan beberapa senyawa hilang. Selain itu, beberapa senyawa mungkin
saja sulit diekstraksi pada suhu kamar. Namun di sisi lain, metode maserasi dapat
menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil
Selama proses maserasi atau perendaman dilakukan pengocokan berulang-
ulang. Upaya ini menjamin keseimbangan konsentrasi bahan ekstraksi yang lebih
cepat didalam cairan. Sedangkan keadaan diam selama maserasi menyebabkan
turunnya perpindahan bahan aktif. Secara teoritis pada suatu maserasi tidak
memungkinkan terjadinya ekstraksi absolut. Semakin besar perbandingan
simplisia terhadap cairan pengekstraksi, akan semakin banyak hasil yang diperoleh
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru dan sempurna
(Exhaustiva extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan.
Prinsip perkolasi adalah dengan menempatkan serbuk simplisia pada suatu bejana
silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat seperti berpori. Proses terdiri dari
tahap pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetasan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak
(perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan (Depkes RI, 2000).
Pada metode perkolasi, serbuk sampel dibasahi secara perlahan dalam
sebuah perkolator (wadah silinder yang dilengkapi dengan kran pada bagian
bawahnya). Pelarut ditambahkan pada bagian atas serbuk sampel dan dibiarkan
menetes perlahan pada bagian bawah. Kelebihan dari metode ini adalah sampel
senantiasa dialiri oleh pelarut baru. Sedangkan kerugiannya adalah jika sampel
dalam perkolator tidak homogen maka pelarut akan sulit menjangkau seluruh area.
Selain itu, metode ini juga membutuhkan banyak pelarut dan memakan banyak
waktu
c. Sokletasi
Soxkletasi merupakan proses ekstraksi dengan memakai pelarut yang
selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus soxklet sehingga terjadi
ekstraksi konstan dengan adanya pendingin balik. Caranya, serbuk bahan
ditempatkan pada selongsong dengan pembungkus kertas saring, lalu ditempatkan
pada alat soxklet yang telah dipasang labu dibawahnya. Tambahkan pelarut
sebanyak 2 kali sirkulasi. Pasang pendingin balik, panaskan labu, ekstraksi
berlangsung minimal 3 jam dengan interval sirkulasi kira-kira 15 menit
Metode ini dilakukan dengan menempatkan serbuk sampel dalam sarung
selulosa (dapat dipakai kertas saring) dalam klonsong yang ditempatkan di atas
labu dan di bawah kondensor. Pelarut yang sesuai dimasukkan ke dalam labu dan
suhu penangas diatur di bawah suhu reflux. Keuntungan dari metode ini adalah
proses ektraksi yang kontinyu, sampel terekstraksi oleh pelarut murni hasil
kondensasi sehingga tidak membutuhkan banyak pelarut dan tidak memakan
banyak waktu. Kerugiannya adalah senyawa yang bersifat termolabil dapat
terdegradasi karena ekstrak yang diperoleh terus-menerus berada pada titik didih.
d. Destillasi uap
Destilasi uap memiliki proses yang sama dan biasanya dipakai untuk
mengekstraksi minyak esensial (campuran berbagai senyawa menguap). Selama
pemanasan, uap terkondensasi dan destilat (terpisah sebagai 2 bagian yang tidak
saling bercampur) ditampung dalam wadah yang terhubung dengan kondensor.
Kerugian dari metode ini adalah senyawa yang bersifat termolabil dapat
terdegradasi
Proses destilasi lebih banyak dipakai untuk senyawa organik yang tahan
pada suhu yang cukup tinggi, yang lebih tinggi dari titik didih pelarut yang
dipakai
e. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan
adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna
Pada metode reflux, sampel dimasukkan bersama pelarut ke dalam labu
yang dihubungkan dengan kondensor. Pelarut dipanaskan hingga mencapai titik
didih. Uap terkondensasi dan kembali ke dalam labu. Kerugian dari metode ini
adalah senyawa yang bersifat termolabil dapat terdegradasi
f. Infudasi
Infudasi merupakan metode ekstraksi dengan pelarut air. Pada waktu
proses infusdasi berlangsung, temperatur pelarut air harus mencapai suhu 90ºC
selama 15 menit. Rasio berat bahan dan air adalah 1 : 10, artinya jika berat bahan
100 gr maka volume air sebagai pelarut adalah 1000 ml. Cara yang biasa
dilakukan adalah serbuk bahan dipanaskan dalam panci dengan air secukupnya
selama 15 menit terhitung mulai suhu mencapai 90ºC sambil sekali-sekali diaduk.
Saring selagi panas melalui kain flanel, tambahkan air panas secukupnya melalui
ampas hingga diperoleh volume yang diinginkan. Apabila bahan mengandung
minyak atsiri, penyaringan dilakukan sesudah dingin
g. Dekosi
Dekosi merupakan proses ekstraksi yang mirip dengan infusdasi, hanya
saja infus yang dibuat membutuhkan waktu lebih lama (≥30 menit) dan suhu
pelarut sama dengan titik didih air. Caranya, serbuk bahan ditambah air dengan
rasio 1:10, panaskan dalam panci enamel atau panci stainless steel selama 30
menit. Bahan sesekali diaduk. Saring pada kondisi panas melalui kain flanel,
tambahkan air panas secukupnya melalui ampas sehingga diperoleh volume yang
diinginkan
h. Ultrasound - Assisted Solvent Extraction
Merupakan metode maserasi yang dimodifikasi dengan memakai
bantuan ultrasound (sinyal dengan frekuensi tinggi, 20 kHz). Wadah yang berisi
serbuk sampel ditempatkan dalam wadah ultrasonic dan ultrasound. Hal ini
dilakukan untuk memberikan tekanan mekanik pada sel hingga menghasilkan
rongga pada sampel. Kerusakan sel dapat menyebabkan peningkatan kelarutan
senyawa dalam pelarut dan meningkatkan hasil ekstraksi (Seidel, 2006).
Getaran ultrasonik (>20.000 Hz) memberikan efek pada ekstrak dengan
prinsip meningkatkan permiabilitas dinsing sel, menimbulkan gelembung spontan
(cavitation) sebagai stres dinamis serta menimbulkan fraksi intertahap . Hasil
ekstraksi tergantung pada frekuensi getaran, kapasitas alat dan lama proses
ultrasonikasi
G. Fraksinasi dengan Metode Kromatografi Cair Vakum
Kromatografi cair vakum adalah metode yang berguna untuk fraksinasi
ekstrak kompleks dalam jumlah besar, karena cepat dan memiliki daya pemisahan
yang efisien, kromatografi cair vakum (KCV) dapat dipakai sebagai prosedur
pemisahan awal suatu ekstrak .
Prinsip kerja kromatografi cair vakum (KCV) adalah adsorpsi atau serapan,
sedangkan pemisahannya didasarkan pada senyawa-senyawa yang akan
dipisahkan terdistribusi di antara fasa diam dan fasa gerak dalam perbandingan
yang berbeda-beda . Prosedur kerja kromatografi cair
vakum (KCV) memakai alat bantu yang berupa pompa vakum untuk
mempercepat laju alir fasa gerak selama proses pemidahan zat terlarut.
Kolom kromatografi dekemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT
10-40 µm) dalam keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum.
Pompa vakum dihentikan dan pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke
permukaan penjerap lalu divakumkan kembali. Kolom dihisap sampai kering dan
telah siap dipakai. Cuplikan dilarutkan dalam pelarut yang cocok, dimulai dengan
pelarut yang kepolarannya rendah lalu kepolarannya ditingkatkan perlahan-lahan.
Kolom dihisap sampai kering pada setiap pengumpulan fraksi. Oleh karena itu,
kromatografi vakum cair memakai tekanan rendah untuk meningkatkan laju
aliran tahap gerak
Kromatografi cair vakum (KCV) memiliki keuntungan yang utama
dibandingkan dengan kolom konvensional yaitu:
a. Konsumsi tahap gerak kromatografi cair vakum (KCV) hanya 80% atau lebih
kecil dibanding dengan kolom konvensional karena pada kolom mikrobor
kecepatan alir tahap gerak lebih lambat (10-100 µl/menit.
b. Adanya aliran tahap gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih ideal
jika digabung dengan spektrometer massa.
c. Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih pekat karenanya
jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas misal smpel
klinis.
H. Metode Pemisahan Secara Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis merupakan suatu cara pemisahan dengan adsorbsi
pada lapisan tipis adsorben yang dapat dipakai untuk memisahkan berbagai
senyawa seperti ion-ion organik, kompleks senyawa-senyawa organik dan
senyawa-senyawa organik baik yang di alam maupun senyawa-senyawa organik
sintesis
Kromatografi lapis tipis atau TLC seperti halnya kromatografi kertas,
murah mudah dilakukan. Kromatografi ini memiliki satu keunggulan dari segi
kecepatan dari kromatografi kertas. Proses kromatografi lapis tipis membutuhkan
hanya setengah jam saja. TLC sangat terkenal dan rutin dipakai diberbagai
laboratorium
KLT dipakai secara luas untuk analisis solut-solut organik terutama
dalam bidang biokimia, farmasi, klinis, forensic, baik untuk analisis kuantitatif
dengan cara membandingkan nilai Rf (retardation faktor) solut dengan nilai Rf
senyawa baku atau untuk analisis kualitatif. Persamaan unuk retardation faktor
(Rf) dapat di lihat sebagai berikut:
Rf
Pada kromatografi lapis tipis, tahap diam berupa lapisan tipis (ketebalan 0,1-
2 mm) yang terdiri atas bahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga
datar yang biasanya terbuat dari kaca, tetapi dapat pula terbuat dari polimer atau
logam. Lapisan melekat pada permukaan dengan bantuan pengikat, biasanya
dengan kalsium sulfat atau amilum (Gritter et al, 1991: 109). tahap diam yang
dipakai dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter
partikel antara 10-30 µm. Penjerap yang sering dipakai adalah silika dan serbuk
selulosa, sementara mekanisme adsorpsi yang utama pada KLT adalah partisi dan
adsorbsi
tahap gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering
dipakai dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar.
Sistem yang paling sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi
campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga
pemisahan dapat terjadi secara optimal
Prinsip KLT adalah pemisahan secara fisikokimia. Lapisan yang
memisahkan yang terdiri dari bahan yang berbutir-butir (tahap diam), ditempatkan
dalam penyangga berupa palat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran
yang akan dipisah berupa larutan yang ditotolkan, berupa bercak atau pita (awal).
sesudah palat atu lapisan ditaruh di dalam bejana yang ditutup rapat berisi tahap
gerak, pemisahan terjadi selama pengembangan. Senyawa berwarna terdeteksi
Lapisan tipis sering mengandung indikator flouresensi yang ditambahkan
untuk membantu penampakan bercak berwarna pada lapisan yang dikembangkan
indikator flouresensi ialah senyawa yang memancarkan sinar tampak jika disinari
dengan sinar berpanjang gelombang lain, biasanya sinar uv. Indikator flouresensi
yang paling berguna ialah sulfide anorganik yang memancarkan cahaya jika
disinari cahaya pada panjang gelombang 254 nm. Beberapa senyawa organik
bersinar atau berflouresensi sendiri jika disinari pada panjang gelombang 254 nm
atau 366 nm dan dapat tampak dengan mudah
I. Tinjauan Islam Mengenai Penelitian Tanaman Obat
Kesehatan merupakan sumber daya yang paling berharga, serta kekayaan
yang paling mahal harganya. Ada sebagian orang yang menganggap bahwa agama
tidak memiliki kepedulian terhadap kesehatan manusia. Anggapan semacam ini
didasari oleh pandangan bahwa agama hanya memperhatikan aspek-aspek rohania
belaka tanpa mengindahkan aspek jasmania. Agama hanya memperhatikan hal-hal
yang bersifat ukhrawi dan lalai terhadap segala sesuatu yang bersifat duniawi.
Anggapan seperti ini tidak dibenarkan dalam ajaran agama islam. Sebab pada
kenyataannya Islam merupakan agama yang memperhatikan dua sisi kebaikan
yaitu kebaikan duniawi dan ukhrawi.
Dalam Al-Qur’an banyak disebutkan mengenai potensi tumbuh-tumbuhan
yang dapat dimanfaatkan oleh manusia. Sebagimana yang telah dijelaskan dalam
QS. Thaahaa / 20: 53.
“Yang telah menjadikan bagimu bumi sebagai hamparan dan yang telah
menjdikan bagimu di bumi itu jalan-jalan, dan menurunkan dari langit air hujan.
Maka kami tumbuhkan dengan air hujan itu berjenis-jenis dari tumbuh-tumbuhan
yang bermacam-macam”
Menurut M. Quraish Shihab dalam bukunya Tafsir Al-Misbah, bahwa Dia
menurunkan dari langit air, maka Kami tumbuhkan dengannya berjenis-jenis
tumbuh-tumbuhan yang bermacam-macam yang dimana merupakan bagian dari
hidayahnya kepada manusia dan binatang guna memanfaatkan buah-buahan dan
tumbuh-tumbuhan itu untuk kelanjutan hidupnya, sebagaimana ada pula
isyarat bahwa Dia memberi hidayah kepada langit guna menurunkan hujan untuk
tumbuh-tumbuhan dapat dipahami dalam arti jenis-jenis tumbuhan, katakanlah
seperti tumbuhan berkeping dua (dikotil) semacam kacang-kacangan, atau
tumbuhan berkeping satu (monokotil) seperti pisang, nanas, palem, dan lain-lain
Dalam buku Shahih Tafsir Ibnu Katsir jilid 5, menjelaskan bahwa “Dan
yang menurunkan air dari langit, kemudian kami tumbuhkan dengannya berjeni-
jenis aneka macam tumbuh-tumbuhan” Maksudnya, berbagai macam tumbuh-
tumbuhan, tanaman, dan buah-buahan, ada yang asam, manis, pahit, dan yang
lainnya yang bermanfaat bagi kehidupan
Dari ayat di atas ditarik sebuah pemahaman bahwa Allah swt memberi
hidayah kepada manusia dengan menurunkan air dari langit berupa hujan, lalu
ditumbuhkan dari air itu aneka macam dan jenis tumbuhan yang memberikan
manfaat bagi kehidupan. Tumbuhan menjadi rezeki bagi makhluk hidup yang
dijadikan sebagai bahan pangan, bahan sandang, bahan obat-obatan dan lain-lain.
Begitu banyak manfaat tumbuh-tumbuhan bagi makhluk hidup, sedangkan
tumbuhan merupakan makhluk yang tidak pernah mengharapkan balasan dari
makhluk lain.
Tumbuhan atau tanaman adalah apotek lengkap yang mengandung zat aktif
dari variatif yang telah diciptakan Allah swt dengan hikmah dan takdirnya. Semua
yang diciptakan Allah swt memiliki manfaat, termasuk tumbuh-tumbuhan. Akan
tetapi untuk pemanfaatan tumbuhan ini diperlukan ilmu dan pengalaman
(teoritis dan empiris) dengan penelitian dan eksperimen. Salah satu contohnya
dalam pemanfaatannya sebagai obat.
Allah swt menciptakan tumbuhan dan menumbuhkannya di bumi tak lain
untuk kebaikan bagi manusia karena banyak jenis tumbuhan yang memberikan
banyak manfaat bagi manusia. Untuk itu pentingnya ilmu pengetahuan dalam hal
ini. Sehingga pengolahan dan pemanfaatan tanaman termasuk tanaman majapahit
ini dapat dilakukan secara maksimal dan sesuai dengan tuntutan Islam.
Tumbuhan yang dapat dipakai sebagai bahan obat merupakan tumbuhan
yang dilebihkan atas tumbuhan lainnya oleh Allah, karena tumbuhan ini
memiliki khasiat khusus yang dapat dimanfaatkan, namun untuk mengetahui
khasiat atau kegunaannya perlu dilakukan penelitian tentang tanaman ini ,
sebagaimana firman Allah SWT dalam Q.S Ar-Ra’d ayat 4 yang berbunyi:
Dan di bumi ini ada bagian-bagian yang berdampingan, dan kebun-kebun
anggur, tanaman-tanaman dan pohon korma yang bercabang dan yang tidak
bercabang, disirami dengan air yang sama. Kami melebihkan sebahagian tanam-
tanaman itu atas sebahagian yang lain tentang rasanya. Sesungguhnya pada yang
demikian itu ada tanda-tanda (kebesaran Allah) bagi kaum yang berfikir
Dari Mujahid bahwa yang dimaksud dengan Jannaat ialah kebun-kebun
dan apa-apa yang ada di dalamnya, kebun-kebun yang banyak buah-buahan di
dalamnya, di dalamnya ada kebun-kebun berupa pohon anggur, wazar‟un
berarti dari setiap jenis dari berbagai jenis benih atau biji-bijian atau tanaman-
tanaman dari berbagai jenis berupa benih yang bermacam-macam yang bermanfaat
bagi manusia dan hewan. Sinwaanun yang berarti menjadikan beberapa cabang,
Dari Khushaif bahwa yang dimaksud dengan shinwaan ialah cabang yang
merupakan bagian dari pohon yang pada dasarnya berkumpul menjadi satu
kemudian menjadi banyak (Al Maragi, 1365 H. Arabiah Assuudiyah, 1419 H.
Wahbah al-Zuhaili, 1418 H.)
Dalam ilmu pengetahuan modern disebutkan bahwa Al-Qur’an memiliki
beberapa tumbuhan yang dapat mencegah sampai menyembuhkan penyakit. Allah
menyuruh manusia supaya memperhatikan keragaman dan keindahan disertai
seruan agar merenungkan ciptaanNya yang menakjubkan. Rasululluh saw.
bersabda, dalam hadits Abu Hurairah RA :
يَِبأ ِنْب ِديِعَس ُنْب ُرَمُع اَن َث َّدَح ،ُّيِرْي َبُّزلا َدَمْحَأ ُوَبأ اَن َث َّدَح ،ىَّن َثُملا ُنْب ُدَّمَحُم اَن َث َّدَح
ِّيِبَّنلا ِنَع ،ُوْنَع ُوَّللا َيِضَر َةَر ْيَرُى يَِبأ ْنَع ،ٍحَاَبر يَِبأ ُنْب ُءَاطَع يَِنث َّدَح :َلَاق ،ٍنْيَسُح
َلَع ُللها ىَّلَص :َلَاق َمَّلَسَو ِوْي« ًءاَفِش ُوَل َلَز َْنأ َّلَِّإ ًءاَد ُوَّللا َلَز َْنأ اَم» )يراخبلا هاور(
Artinya :
Muhammad bin al-Mutsanna menceritakan kepada kami, Abu Ahmad al-Zubairiy
menceritakan kepada kami, „Umar bin Sa‟id bin Abi Husain menceritakan kepada
kami, dia berkata: „Atha‟ bin Abi Rabah menceritakan kepadaku, dari Abi
Hurairah r.a., dari Nabi saw. dia bersabda: Tidaklah Allah menurunkan suatu
penyakit melainkan Allah menurunkan obatnya pula” (H.R. Al-Bukhari: 5678).
Ungkapan “setiap penyakit pasti ada obatnya”, artinya bisa bersifat umum,
sehingga termasuk di dalamnya penyakit-penyakit mematikan dan berbagai
penyakit yang tidak bisa disembuhkan oleh para dokter. Allah sendiri telah
menjadikan untuk penyakit ini obat-obatan yang dapat menyembuhkannya.
Akan tetapi ilmu ini tidak ditampakkan Allah untuk menggapainya. Karena
ilmu pengetahuan yang dimilki oleh manusia hanyalah sebatas yang diajarkan oleh
Allah swt. Oleh sebab itu, kesembuhan terhadap penyakit dikaitkan oleh
Rasulullah dengan proses kesesuaian obat dengan penyakit yang diobati. Karena
setiap ciptaan Allah swt. Itu pasti ada penawarnya
Tumbuhan Majapahit merupakan ciptaan Allah swt berupa tumbuhan yang
dapat memberikan manfaat bagi umat manusia, namun untuk mengetahui atau
membuktikan manfaat dari Majaphit maka perlu untuk diteliti lebih lanjut, hal ini
bertujuan untuk menambah data ilmiah tentang tumbuhan ini , selain itu dari
beberapa hasil penelitian telah membuktikan manfaat dari tumbuhan ini sebagai
anti kanker, hal ini dapat menambah kaimanan kita kepada Allah swt, tidaklah
Allah swt menurunkan penyakit jika Allah tidak menurunkan obatnya.
Bukankah Dia (Allah) yang menciptakan langit dan bumi dan yang menurunkan
air dari langit untukmu, lalu Kami tumbuhkan dengan air itu kebbun-kebun yang
beremandangan indah ?. Kamu tidak akan mampu menumbuhkan pohon-
pohonnya. Apakah disamping Allah ada tuhan (yang lain) ?. Sebenarnya mereka
adalah orang-orang yang menyimpang (dari kebenaran)
Atau siapakah yang telah menciptakan langit dan bumi maksudnya Tuhan
kalianlah yang telah menciptakan langit dan bumi dan yang menurunkan air
untukmu dari langit yaitu berupa air hujan ،lalu kami tumbuhkan dengan air itu
kebun-kebun yang berpemandangan indah ,pemandangan yang baik bagi siapa
saja yang melihatnya yang kamu sekali-kali tidak mampu menumbuhkan pohon-
pohonnya karena kamu tidak ada kemampuan untuk hal itu ,apakah disamping
Allah ada tuhan yang lain?, Sebuah pertanyaan pengingkaran, apakah ada Tuhan
selain Allah ?, bahkan mereka sebenarnya adalah orang-orang kafir Makkah
yang menyimpang mereka menyekutukan Allah (Al-Bagawi, 1471 H.).
Penelitian ini adalah penelitian kuantitatif yang dilakukan secara
eksperimental laboratori. Perlakuan dengan pemberian ekstrak metanol daun
majapahit (Criscentia cujete L.) terhadap larva Artemia salina Leach.
2. Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi, Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
B. Instrumen Penelitian / Pengumpulan Data
1. Alat-alat yang dipakai
Alat-alat yang dipakai dalam penelitian ini adalah aerator (Whale®), batang
pengaduk, cawan porselin, chamber, corong buchner, corong kaca, erlenmeyer
(pyrex®), gelas piala (pyrex®) 250 ml, gelas ukur (pyrex®), lampu pijar, lampu UV
254 dan 366 nm, mikropipet (Nesco®), pipa kapiler (Nesco®), rak tabung, rotavapor
(IKA®), sendok tanduk, seperangkat alat uji BSLT, seperangkat alat kromatografi cair
vakum, seperangkat alat sentrifuge, spatel besi, tabung reaksi (pyrex®), tabung
sentrifuge, timbangan analitik (Precisa®), timbangan kasar (O’ Hauss®), vial dan
wadah maserasi.
2. Bahan-bahan yang dipakai
Bahan-bahan yang dipakai adalah air laut, air suling, daun majapahit
(Criscentia cujete L.) etil asetat, kertas saring, lempeng silica gel F254, n-heksan,
metanol, ragi, silica gel 60 PF254, dan larva udang (Artemia salina Leach).
C. Tekhnik Pengolahan
1. Penyiapan Sampel
a. Pengambilan Sampel
Sampel penelitian yang dipakai adalah daun majapahit (Crescentia cujete
L.) yang berasal dari daerah Parangloe, Sulawesi-Selatan.Pengambilan sampel
dilakukan pada pukul 09.00 WITA.
b. Pengolahan Sampel
Sampel yang telah diambil kemudian disortasi basah untuk memisahkan
sampel dari kotoran-kotoran atau bahan asing lainnya. Kemudian sampel dicuci
dengan air bersih yang mengalir untuk menghilangkan tanah atau pengotor lainnya
yang melekat pada daun. sesudah itu sampel dirajang kecil-kecil lalu dikeringkan
dengan cara diangin-anginkan terlindung dari sinar matahari atau dimasukkan ke
dalam lemari pengering.
c. Ekstraksi Sampel
Sampel daun majapahit (Crescentia cujete L.) yang telah kering ditimbang
sebanyak 1000 gram untuk diekstraksi dengan metode maserasi memakai pelarut
metanol. Sampel dimasukan kedalam bejana maserasi kemudian sampel direndam
dengan pelarut metanol. Wadah maserasi ditutup dan disimpan selama 24 jam di
tempat yang terlindung sinar matahari langsung sambil sesekali diaduk, selanjutnya
disaring, dipisahkan antara ampas dan filtrat. Ampas diekstraksi kembali dengan
penyari yang baru dengan jumlah yang sama, dilakukan selama 3 hari. Ekstrak
metanol yang diperoleh kemudian diuapkan cairan penyarinya dalam rotary
evaporator hingga diperoleh ekstrak metanol kental.
2. Partisi Cair - Padat
Ekstrak kental metanol yang diperoleh dipartisi cair-padat memakai
pelarut n-heksan sebanyak 18 kali. Ekstrak larut n-heksan ini dipekatkan
memakai rotary evaporator lalu dimonitor toksisitas akutnya dengan uji BSLT
memakai larva Artemia salina Leach.
3. Kromatografi Lapis Tipis
a. Penjenuhan Chamber
Cairan pengelusi yang dipakai dimasukkan ke dalam chamber setinggi
lebih kurang 0,5 cm kemudian diberi kertas. Kejenuhan chamber ditandai dengan
naiknya cairan pengelusi pada kertas saring hingga melewati kaca penutup.
b. Penotolan Sampel Pada Lempeng
Ekstrak metanol ditotolkan pada lempeng bagian batas bawahnya. Lempeng
dielusi dengan eluen yang dikehendaki dalam chamber sampai cairan pengelusi
mengelusi lempeng sampai batas akhir. Lempeng dikeluarkan dan diangin-anginkan.
Amati noda yang terbentuk pada lempeng. Perbandingan eluen yang mengelusi
sampel dengan baik dipakai sebagai profil KLT.
4. Fraksinasi Komponen Kimia
a. Persiapan Kolom Kromatografi Cair Vakum
Senter glass kromatografi cair vakum dibersihkan kemudian dipasang tegak
lurus. Adsorben (silika gel 60 PF254) dimasukkan dalam senter glass selanjutnya
pompa vakum dijalankan hingga adsorben (silika gel) rapat atau mampat.
b. Pemisahan Komponen Kimia
Ekstrak larut metanol ditimbang sebanyak 2 gram. Kemudian ditimbang silika
gel sebanyak 20 gram. Ekstrak larut metanol kemudian dilarutkan dengan sedikit
metanol. Silika gel ditambahkan sedikit demi sedikit kemudian diaduk hingga
homogeny didiamkan hingga kering. sesudah kering dimasukkan ke dalam senter
glass dan bagian atasnya ditutup dengan kertas saring. Ekstrak difraksinasi
memakai kromatografi kolom cair vakum (KCV) memakai tahap diam silika gel
60 PF254 dan tahap gerak dengan gradien kepolaran yang meningkat berdasarkan profil
KLT yang diperoleh. Hasil fraksinasi yang diperoleh masing masing diuji
toksisitasnya dengan uji BSLT.
5. Uji Toksisitas Akut
a. Penyiapan larva Udang
Langkah awal dalam penyiapan larva udang yaitu dengan merendam kista
dalam wadah berbentuk kerucut yang berisi air laut atau air yang diberi garam dapur
sebanyak 37 gram ke dalam 1 liter air tawar. Alat penetas dilengkapi dengan lampu
sebagai sumber cahaya dan diberi aerator yang berfungsi sebagai penyuplai oksigen
dan menjaga agar telur tidak mengendap. Ditimbang kista sebanyak 5 gram per liter
air. Kista dimasukkan pada wadah dan akan menetas kira-kira 24 jam sesudah
ditaburkan. Selanjutnya larva dipindahkan dalam kotak kecil berisi 500 ml air laut
yang telah terbagi menjadi dua ruang yang dihubungkan oleh lubang-lubang kecil.
Ruang penetasan diberi kondisi gelap sedangkan yang lain diberi penerangan dan
aerator. Larva yang baik akan berenang menuju ruang yang terang karena mereka
bersifat fototropik. Larva udang akan siap untuk dipakai dalam pengujian sesudah
berumur 48 jam.
b. Pembuatan Konsentrasi Sampel dan Kontrol
Ekstrak metanol dari daun majapahit (Crescentia cujete L.) ditimbang
sebanyak 50 mg. Kemudian ekstrak ini dilarutkan dalam pelarut metanol
sebanyak 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10000 μg/ml sebagai larutan stok.
Untuk membuat konsentrasi 10 μg/ml, 100 μg/ml dan 1000 μg/ml, maka dari larutan
stok ini dipipet ke dalam vial masing-masing 5 μl, 50 μl, dan 500 μl
memakai mikropipet, kemudian diuapkan dengan diangin-anginkan hingga
pelarutnya menguap.
c. Pelaksanaan uji
Pengujian sampel dilakukan dengan cara memasukkan masing-masing sampel
ke dalam vial yang kemudian diuapkan dengan diangin-anginkan hingga pelarutnya
hilang.
Selanjutnya vial diisi air laut 1 ml lalu dimasukkan 10 ekor Artemia salina
Leach. Umur 48 jam yang sehat (bergerak aktif) dipilih secara acak lalu dimasukkan
ke dalam vial yang berisi sampel yang bebas pelarut memakai pipet tetes
kemudian ditambahkan air laut sampai 5 ml.
Satu tetes suspensi ragi Saccharomyces cereviceae (3 mg/10 ml air laut)
ditambahkan ke dalamnya sebagai makanan Artemia salina Leach. Vial diletakkan di
bawah lampu penerangan selama 24 jam. sesudah 24 jam jumlah larva yang hidup
dihitung dengan bantuan kaca pembesar. Persen kematian larva dihitung dengan
memakai rumus:
% kematian larva = x 100 %
d. Analisis dan Pengolahan Data
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan dihitung dengan memakai
analisis probit untuk mendapatkan LC50.
6. Identifikasi Komponen Kimia
Kromatogram atau lempeng diamati di bawah UV 254 dan 366 nm kemudian
disemprot dengan memakai pereaksi penampak noda antara lain sebagai berikut
a. Alkaloid
Pereaksi yang dipakai yaitu Dragendorf, jika sampel positif mengandung
alkaloid, maka timbul warna jingga dengan latar belakang kuning.
b. Steroid
Pereaksi yang dipakai Liebermann-Burchard atau pereaksi Salkowski.
Kromatogram terlebih dahulu dipanaskan, kemudian diamati di lampu UV 366 nm,
munculnya noda berflouresensi coklat atau biru menunjukkan adanya triterpen,
sedangkan munculnya warna hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.
c. Flavanoid
Pereaksi yang dipakai yaitu Aluminium Klorida diamati di lampu UV 366
nm, jika sampel mengandung senyawa flavanoid maka noda akan berfluoresensi
kuning.
d. Fenol
Pereaksi yang dipakai Besi (III) Klorida, jika sampel positif mengandung
fenol akan dihasilkan warna hijau atau biru.
e. Khumarin
Pereaksi yang dipakai KOH etanolik, jika sampel positif mengandung
senyawa khumarin akan dihasilkan warna merah terang.
1. Hasil Ekstraksi Daun Majapahit
Hasil maserasi 800 gram daun majapahit (Crescentia cujete L.) yang telah
kering dengan metode maserasi dengan memakai pelarut metanol diperoleh
ekstrak kering 30,2 gram.
2. Fraksinasi Sampel
Ekstrak metanol daun majapahit (Crescentia cujete L.) sebanyak 2 gram
difraksinasi memakai kromatografi cair vakum (KCV) diperoleh 16 fraksi.
Fraksi yang memiliki kesamaan profil KLT digabung sehingga diperoleh 3 fraksi
yaitu A (fraksi 1-4) seberat 0,5 gram, B (fraksi 5-8) seberat 0,85 gram, C (fraksi 9-16)
seberat 0,98 gram.
3. Uji BSLT (Brine Shirmp Lethality Test)
Skrining toksisitas ekstrak metanol daun majapahit (Crescentia cujete L.)
dengan metode BSLT (Brine Shirmp Lethality Test) memakai larva Artemia
salina Leach berumur 48 jam, dengan konsentrasi 10, 100, 1000 µg/ml.
Ekstrak n-heksan daun majapahit (Crescentia cujete L.) memiliki efek
toksik terhadap Artemia salina Leach. Ekstrak ini kemudian difraksinasi dengan
metode Kromatografi Cair Vakum (KCV). Masing-masing hasil fraksinasi diuji
kembali toksisitasnya dengan metode BSLT (Brine Shirmp Lethality Test) dengan
konsentrasi yaitu 10, 100, dan 1000 µg/ml.
4. Identifikasi Senyawa Bioaktif
Fraksi B yang memiliki toksisitas tertinggi selanjutnya diidentifikasi dengan
berbagai pereaksi sebagai berikut :
Tabel 3. Hasil identifikasi komponen kimia daun majapahit (Crescentia cujete L.)
No. Pereaksi Jenis Senyawa Hasil
1. Dragendorf Alkaloid -
2. AlCl3 Flavonoid +
3. Lieberman-Bouchard Steroid +
4. KOH Khumarin -
5. FeCl3 Fenol +
6. H2SO4 Senyawa Organik -
B. Pembahasan
Sampel yang dipakai dalam penelitian ini adalah daun majapahit
(Crescentia cujete L.). Tanaman ini termasuk keluarga Bignoniaceae. Daun majapahit
dipakai sebagai penghambat angiogenesis (Anjar Mahardian Kusuma,2014).
Pemisahan komponen kimia daun majapahit (Crescentia cujete L.)
dilakukan secara bertahap yang meliputi ekstraksi dan fraksinasi, masing-masing
hasil pemisahan ini dilakukan pengujian Bioassay memakai metode Brine
Shirmp Lethality Test (BSLT) sebagai proses pengujian toksisitas yang terbukti
memiliki efek toksik. Pada penelitian ini proses pemisahan komponen bioaktif dari
daun majapahit dilakukan secara bertahap memakai metode ekstraksi dengan
cara maserasi dan fraksinasi memakai Kromatografi Cair Vakum (KCV) untuk
memperoleh komponen senyawa yang lebih spesifik. Kromatografi Cair Vakum
(KCV) memiliki kekuatan memisahkan yang bagus, mudah diaplikasikan dalam
kromatografi skala besar (sampai 100 gram) dan cepat. Teknik ini ekonomis dan
secara signifikan mengurangi pemakaian pelarut dan jumlah silika yang dipakai .
Artinya setiap komponen akan ada di sedikit fraksi dan mengurangi
tercampurnya setiap fraksi jika diamati (Pedersen dan Rosenbohn, 2009).
Mula-mula sampel dibuat menjadi bentuk simplisia lalu diserbukkan, hal ini
dilakukan untuk memperbesar luas permukaan sampel sehingga kontak antara cairan
penyari dan sampel lebih besar sehingga memudahkan penyarian komponen kimia
yang ada dalam sampel. Sampel diekstraksi dengan memakai metode
maserasi dengan pelarut metanol hingga bening. Komponen kimia yang memiliki
kepolaran yang sama dengan kepolaran metanol akan ikut tertarik atau tersari,
sehingga akan di dapatkan ekstrak metanol yang cair. Untuk mendapatkan ekstrak
yang lebih kental maka ekstrak yang didapatkan dipekatkan dengan bantuan alat
Rotavapor. Dimana prinsip pemekatan ekstrak pada alat ini yaitu dengan cara
memisahkan ekstrak dengan cairan penyarinya berdasarkan titik didihnya sehingga
akan didapatkan ekstrak yang lebih pekat atau ekstrak yang lebih kental.
Uji toksisitas ekstrak daun majapahit (Crescentia cujete L.) dipandu oleh uji
Brine Shirmp Lethality Test (BSLT) pada setiap pengerjaan, begitupula dengan hasil
fraksinasinya sehingga diperoleh fraksi yang memiliki efek toksik yang tinggi
terhadap Artemia salina Leach ekstrak metanol daun majapahit (Crescentia cujete
L.). Uji toksisitas dengan larva udang Artemia salina Leach dipilih karena
pengerjaannya yang sederhana, murah, mudah, cepat pelaksanaannya dan memiliki
korelasi positif terhadap efek toksiknya. pemakaian larva udang sebagai hewan uji
ketoksikan disebabkan karena ukurannya yang sangat kecil sehingga tidak
membutuhkan sampel yang banyak dan tidak sulit dalam penanganan. Metode Brine
Shirmp Lethality Test (BSLT) dilakukan untuk mendeteksi keberadaan senyawa
toksik yang dipakai untuk memonitor dalam isolasi senyawa dari tumbuhan yang
berefek toksik dengan menentukan nilai LC50 dari senyawa aktif. Larva Artemia
salina Leach diuji pada saat berumur 48 jam karena pada umur ini Artemia
salina Leach mengalami pertumbuhan sel yang abnormal.
Ekstrak yang diperoleh diuji efek toksiknya terhadap Artemia salina Leach
dengan memakai konsentrasi 10, 100, 1000 µg/ml. Hal ini dimaksudkan untuk
melihat variasi respon yang diberikan. Bila LC50 di bawah 1000 µg/ml dinyatakan
toksik dan di atas 1000 µg/ml dinyatakan tidak toksik Kontrol
negatif dilakukan untuk melihat apakah respon kematian larva uji benar-benar berasal
dari sampel dan bukan disebabkan oleh pelarut yang dipakai . Hasil pengujian
ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun majapahit (Crescentia cujete L.)
memiliki nilai LC50 = 35.563 μg/ml. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol
daun majapahit (Crescentia cujete L.) memiliki efek toksik terhadap larva udang
Artemia salina Leach.
Ekstrak n-heksan daun majapahit (Crescentia cujete L.) selanjutnya
dilakukan pencarian profil KLT yang bertujuan untuk mengetahui eluen yang sesuai
untuk penampakan nodanya sebelum dilakukan proses fraksinasi. Sehingga
didapatkan profil KLT yaitu dengan memakai eluen n-heksan : etil asetat (3:1).
Selanjutnya difraksinasi dengan metode kromatografi cair vakum (KCV). Metode ini
dipakai karena cepat dan mudah dalam proses pemisahan komponen kimia. Metode
ini dilakukan memakai tahap diam silica gel 60 PF254 dan tahap gerak dengan
gradient kepolaran yang semakin meningkat yaitu berturut-turut n-heksan : etil asetat
(23:1), (18:1), (13:1), (8:1), (3:1), (1:2), (1:7), (1:12), (1:17), (1:22), (1:27), (etil), etil
: metanol (13:1), (8:1), (3:1), dan (metanol).
Kolom dielusi dengan campuran pelarut yang cocok, mulai dengan pelarut
yang kepolarannya rendah lalu kepolaran ditingkatkan perlahan-lahan, kolom dihisap
sampai kering pada setiap pengumpulan fraksi. Oleh karena itu kromatografi cair
vakum memakai tekanan rendah untuk meningkatkan laju aliran tahap gerak
Dari proses fraksinasi yang memakai 16 perbandingan pelarut yang
tingkat kepolarannya mulai dari rendah kekepolaran yang lebih tinggi, maka
didapatkan pula 16 hasil fraksi, dimana hasil fraksinasi ini akan dilakukan
proses KLT untuk menggabungkan hasil fraksinya yang dianggap mengandung
senyawa yang sama dengan cara melihat penampakan nodanya, kemudian dari proses
KLT ini maka didapatkan dari 16 hasil fraksi menjadi 3 hasil fraksi yaitu fraksi
A (fraksi 1-4) seberat 0,5 gram, B (fraksi 5-8) seberat 0,85 gram, C (fraksi 9-16)
seberat 0,98 gram.
Fraksi yang diperoleh selanjutnya diuji kembali dengan metode Brine
Shirmp Lethality Test (BSLT) dengan konsentrasi 10 µg/ml, 100 µg/ml, dan 1000
µg/ml. Hal ini dipakai untuk mengetahui apakah efek toksik hasil fraksinasi lebih
besar atau lebih kecil dibandingkan dengan efek toksik ekstrak awal. Hasil
pengamatan menunjukkan bahwa fraksi B memiliki efek toksik yang paling besar
terhadap larva Artemia salina Leach dengan nilai LC50 = 6.0117 μg/ml, sedangkan
LC50 fraksi A = 19.724, B = 6.0117 dan C = 88.307. Hasil ini menunjukkan
bahwa hanya fraksi B yang memiliki efek toksik dari ekstrak awal. Fraksi yang lain
menjadi kurang toksik sesudah difraksinasi diduga karena disebabkan oleh efek
senyawa kimia yang ada dalam ekstrak.
Fraksi B selanjutnya diidentifikasi senyawa golongannya. Mula-mula fraksi
B diencerkan lalu ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi dengan n-heksan :
etil asetat (3:1). Hasil kromatogramnya disemprot dengan memakai pereaksi
penampak noda seperti dragendorft untuk golongan alkaloid, FeCl3 5% untuk
senyawa golongan fenol, pereaksi Lieberman-Bouchard untuk golongan senyawa
steroid, serta pereaksi AlCl3 5% untuk senyawa flavonoid. KOH untuk golongan
senyawa kumarin, H2SO4 untuk golongan senyawa organic, dan Dragendorf untuk
golongan senyawa alkaloid.
Pada uji identifikasi senyawa golongan memakai pereaksi dragendorf
dengan tidak adanya noda berwarna kuning latar jingga pada pengamatan mata
langsung yang berarti tidak adanya senyawa golongan alkaloid, pereaksi AlCl3
memberikan hasil positif dengan menunjukkan penampakan noda yang berwarna
kuning pada pengamatan di bawah sinar UV gelombang 366 yang berarti
mengandung senyawa golongan flavonoid, pereaksi FeCl3 5% memberikan hasil
positif dengan adanya noda berwarna hitam kehijauan dengan pengamatan mata
langsung yang menunjukkan adanya komponen kimia golongan fenol, dan pereaksi
Lieberman-Bouchard memberikan hasil positif dengan adanya noda berwarna hijau
kebiruan sesudah pemanasan yang menunjukkan adanya komponen kimia steroid.
Mc Laughin (1991) dikatakan toksik ketika nilai LC50 lebih <1000, tidak
toksik ketika nilai LC50 lebih >1000, memiliki potensi sebagai antikanker ketika
LC50 <30, memiliki potensi antimikroba ketika nilai LC50 30-200 dan memiliki
potensi sebagai pestisida ketika nilai LC50 200-1000.
Dari hasil penelitian diperoleh bahwa fraksi B memiliki nilai LC50 = 6.0117
µg/ml. Ini menunjukkan bahwa fraksi B memiliki potensi nilai LC50 sebagai
antikanker. Dan adapun golongan senyawa yang ada pada fraksi B yaitu
flavonoid, fenol, dan steroid.
.jpeg){kind=small}